Karbapenemresistensgen (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP)
Produktnamn
HWTS-OT045 Karbapenemresistensgen (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP) Detektionskit (Fluorescens-PCR)
Epidemiologi
Karbapenemantibiotika är atypiska β-laktamantibiotika med det bredaste antibakteriella spektrumet och den starkaste antibakteriella aktiviteten. På grund av dess stabilitet mot β-laktamaser och låga toxicitet har det blivit ett av de viktigaste antibakteriella läkemedlen för behandling av allvarliga bakterieinfektioner. Karbapenemer är mycket stabila mot plasmidmedierade β-laktamaser med bredt spektrum (ESBL), kromosomer och plasmidmedierade cefalosporinaser (AmpC-enzymer).
Kanal
| PCR-mix 1 | PCR-mix 2 | |
| FAM | IMP | VIM |
| VIC/HEX | Intern kontroll | Intern kontroll |
| CY5 | NDM | KPC |
| ROX | OXA48
| OXA23 |
Tekniska parametrar
| Lagring | ≤-18℃ |
| Hållbarhet | 12 månader |
| Provtyp | Sputum, rena kolonier, rektalprov |
| Ct | ≤36 |
| CV | ≤5,0 % |
| LoD | 103CFU/ml |
| Specificitet | a) Kitet detekterar de standardiserade negativa företagsreferenserna, och resultaten uppfyller kraven för motsvarande referenser. b) Resultaten av korsreaktivitetstestet visar att detta kit inte har någon korsreaktion med andra respiratoriska patogener, såsom Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Staphylococcus aureus, Klebsiella oxytoca, Haemophilus influenzae, Acinetobacter junii, Acinetobacter haemolyticus, Legionella pneumophila, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Candida albicans, Chlamydia pneumoniae, respiratoriskt adenovirus, Enterococcus, eller prover som innehåller andra läkemedelsresistenta gener CTX, mecA, SME, SHV, TEM, etc. c) Antiinterferens: Mucin, minocyklin, gentamicin, klindamycin, imipenem, cefoperazon, meropenem, ciprofloxacinhydroklorid, levofloxacin, klavulansyra och roxitromycin har valts ut för interferenstest, och resultaten visar att ovan nämnda interfererande substanser inte har någon interfererande reaktion vid detektion av karbapenemresistensgenerna KPC, NDM, OXA48, OXA23, VIM och IMP. |
| Tillämpliga instrument | Applied Biosystems 7500 realtids-PCR-system QuantStudio®5 realtids-PCR-system SLAN-96P realtids-PCR-system (Hongshi Medical Technology Co., Ltd.) LightCycler®480 realtids-PCR-system LineGene 9600 Plus realtids-PCR-detekteringssystem (FQD-96A，HangzhouBioer-teknik) MA-6000 realtids kvantitativ termisk cykler (Suzhou Molarray Co., Ltd.) BioRad CFX96 realtids-PCR-system BioRad CFX Opus 96 realtids-PCR-system |
Arbetsflöde
Alternativ 1.
Rekommenderat extraktionsreagens: Macro & Micro-Test General DNA/RNA Kit (HWTS-3019-50, HWTS-3019-32, HWTS-3019-48, HWTS-3019-96) (som kan användas med Macro & Micro-Test Automatic Nucleic Acid Extractor (HWTS-3006C, HWTS-3006B)) från Jiangsu Macro & Micro-Test Med-Tech Co., Ltd.. Tillsätt 200 μL normal saltlösning till thallusfällningen. Efterföljande steg bör följa instruktionerna för extraktion, och den rekommenderade elueringsvolymen är100 μL.
Alternativ 2.
Rekommenderat extraktionsreagens: Nucleic Acid Extraction or Purification Reagent (YDP302) från Tiangen Biotech (Beijing) Co., Ltd. Extraktionen bör påbörjas i strikt enlighet med steg 2 i bruksanvisningen (tillsätt 200 μL buffert GA till thallusfällningen och skaka tills thallusen är helt suspenderad). Använd RNase/DNase-fritt vatten för eluering, och den rekommenderade elueringsvolymen är 100 μL.
Alternativ 3.
Rekommenderat extraktionsreagens: Macro & Micro-Test Sample Release Reagent. Sputumprovet behöver tvättas genom att tillsätta 1 ml normal koksaltlösning till den ovan nämnda behandlade thallusfällningen, centrifugeras vid 13000 r/min i 5 minuter, och supernatanten kasseras (behåll 10–20 µL supernatant). För ren koloni och rektalprov, tillsätt 50 μL provreleasereagens direkt till den ovan nämnda behandlade thallusfällningen, och efterföljande steg bör extraheras enligt bruksanvisningen.
